黄嘌呤氧化酶XOD酶活检测方法

2020-12-24

1原理

Xanthine + O2 + H2O (XOD)-----Uric acid + H2O2

Uric acid的生成可以通过290nm的光吸收进行检测。

2试剂:

A 10mM黄嘌吟溶液

B 50mM Tris-HCl 缓冲液,pH7.5

C酶稀释液:B溶液

3操作规程:

3.1仪器参数设定

若仪器中无已保存参数,按以下参数设定。若已有相关参数,调取后确认。

检测方法:动力学扫描

测量波长:290nm

延迅时间:60S

系数/因子:2.46

3.2样品准备

反应时间:180S

积分时间:120S

测量温度:37±0.5°C

若待测样品为固体,可以按10mg样品/l00ul超纯水比例溶解。溶解后于2-8度放置

30mino

3.3检测方法

3.3.1在石英比色皿中加入0.10ml试剂A, 2.80ml试剂B ,于37度孵育2min。

3.3.2加入l00ul样品,温和混匀后开始测定。

3.3.3测定结束后,记录相应数值:起始读数、△A/min、活性值(U/ml)。

3.3.4活性值(U/ml)范围为0.10-0.25U/ml,若超出范围,待测样品需经试剂B稀释后再

次进行检测。

3.3.5计算公式 活性(U/ml) =△A 290nmx2.46xdf (稀释倍数)